ABSTRACT: Bacteria of the genus Legionella are Gram-negative bacilli and in their natural environment use some species of protozoa to replicate themselves, in humans infect alveolar macrophages, which can lead to severe pneumonia. In the present work was used a strain, Legionella pneumophila subspecies fraseri (ST1905), from the 3rd largest outbreak of Legionnaires Disease in the world, that occurred in 2014, in the municipality of Vila Franca de Xira. It was observed that, morphologically, this strain is different from ST1 which is in accordance with the pleomorphism described for bacteria of this genus. To characterize the strain, it was investigated the duplicating time, obtaining a value of 75 minutes and the viability in drinking water, verifying that the bacteria can survive in these conditions for more than 132 days. It was also studied the internalization capacity of Acanthamoeba castellani (Ac) and the intracellular multiplication rate of the strain in natural hosts. The results revealed that both varied according to the MOI tested (MOI10, 100 and 1000), however, suggest that there is a limit of bacteria that each amoeba can phagocyte and that the MOI10 has a multiplication rate higher than the other studied MOIs. Regarding the objective of studying gene expression after interaction with Ac and comparing the results with those previously obtained in strain ST1, it was found that given the genetic heterogeneity described for the genus Legionella, of the 13 selected genes only eight amplified in strain ST1905.Four are described as being relevant to the survival and multiplication capacity of the bacteria within the hosts. Of these, two (lpp0845 and lpp0972) were repressed and the lpp1315 and the lpp1316 showed no changes in expression after passing by Ac. These results suggest that passage through this host does not increase virulence of strain ST1905.

RESUMO: As bactérias do género Legionella são bacilos Gram-negativos e no seu ambiente natural utilizam algumas espécies de protozoários para se replicarem, no homem infetam os macrófagos alveolares, podendo originar uma pneumonia grave. No presente trabalho foi utilizada uma estirpe, Legionella pneumophila subespécie fraseri (ST1905), proveniente do 3º maior surto a nível mundial de Doença dos Legionários, que ocorreu em 2014, no concelho de Vila Franca de Xira. Observou-se que, morfologicamente, esta estirpe é diferente da ST1 o que está de acordo com o pleomorfismo descrito para bactérias deste género. Para caracterizar a estirpe foi investigado o tempo de duplicação, tendo-se obtido um valor de 75 minutos e o tempo de viabilidade em água potável, verificando-se que as bactérias conseguem sobreviver nestas condições por mais de 132 dias. Foi igualmente estudada a capacidade que Acanthamoeba castellanii (Ac) tem de internalizar esta estirpe e qual a sua taxa de multiplicação intracelular neste hospedeiro natural. Os resultados revelaram que ambas variaram consoante o MOI testado (MOI10, 100 e 1000), no entanto sugerem que existe um limite de bactérias que cada amiba consegue fagocitar e que o MOI10 apresenta uma taxa de multiplicação superior aos restantes MOIs estudados. Relativamente ao objetivo de estudar a expressão génica após a interação com Ac e comparar os resultados com os obtidos anteriormente na estirpe ST1, verificou-se que dada a heterogeneidade genética descrita para o género Legionella, dos 13 genes selecionados apenas oito amplificaram na estirpe ST1905. Quatro estão descritos como sendo relevantes para a capacidade de sobrevivência e de multiplicação da bactéria dentro dos hospedeiros. Destes, dois (lpp0845 e lpp0972) foram reprimidos, o lpp1315 e o lpp1316 não apresentaram alterações na expressão após passagem pela Ac. Estes resultados sugerem que a passagem por este hospedeiro não aumenta a virulência da estirpe ST1905.