RESUMO:A Legionella é uma bactéria ubíqua de ambientes aquáticos e o agente etiológico da Doença dos Legionários (DL). A taxa de letalidade da DL tem variado desde 5% a 30% nos surtos que têm ocorrido a nível mundial. Na Europa, a doença tem uma taxa de mortalidade de 8%. Em Portugal já ocorreram vários surtos, entre eles o de Vila Franca de Xira que envolveu 403 doentes e 14 óbitos. A Legionella infeta macrófagos alveolares humanos ocasionando uma pneumonia potencialmente fatal. O tratamento da DL é eficaz, porém cada vez mais têm sido relatadas falhas devido ao aparecimento de mecanismos de resistência. É, pois, importante estudar o padrão de suscetibilidade da Legionella aos antibióticos e este é o objetivo do presente trabalho. Nele foram realizados testes de suscetibilidade à azitromicina, à ciprofloxacina e à levofloxacina em 42 isolados clínicos recuperados em Portugal, entre 1987 e 2016. O protocolo do EUCAST 2017 recomenda a utilização do meio com carvão ativado, mas como há discussões sobre a sua interferência na determinação da concentração inibitória mínima (MIC), testamos dois meios, o BCYE-α (com carvão) e o BYE (sem carvão) utilizando a estirpe de referência Staphylococcus aureus ATCC 29213 para a qual estão definidos os valores de MIC. Os ensaios realizados confirmaram a alteração do MIC quando se utiliza meio com carvão, aumento de 4 vezes para azitromicina e 8 vezes para ciprofloxacina e levofloxacina versus os valores obtidos no meio padrão, o meio Agar Mueller Hinton. Reproduzidos os testes nas mesmas condições em meio sem carvão (BYE), obtivemos valores de MIC normais para a ciprofloxacina e levofloxacina, mas para azitromicina o valor do MIC ainda se elevou mais. Com estes valores pensamos em realizar os testes de suscetibilidade neste meio, mas, ao testar-se o crescimento da L. pneumophila ATCC 33152, não se obteve qualquer crescimento na concentração necessária para a técnica dos MICs. Para o presente trabalho foi necessário aferir a concentrações bacterianas utilizadas nos testes de suscetibilidade, mas dado que os 42 isolados apresentaram morfologia diversa, foi necessário efetuar contagens das UFC/mL pela técnica de Miles e Misra para conseguir essa padronização. O estudo utilizou o método recomendado pelo EUCAST de 2017 e os resultados revelaram a existência de um isolado com resistência à azitromicina entre os 42 testados. Considera-se que a realização de estudos similares permitirá conhecer o padrão de resistência da Legionella em Portugal, contribuindo para uma adequação do tratamento da DL, evitando falhas terapêuticas e custos relacionados com hospitalizações prolongadas.
ABSTRACT: Legionella is a ubiquitous bacterium in aquatic environments and the etiological agent of Legionnaires'Disease (DL). The lethality rate of DL has varied from 5% to 30% in outbreaks that have occurred worldwide. In Europe, the disease has a mortality rate of 8%. In Portugal, several outbreaks have already occurred, including that in Vila Franca de Xira, which involved 403 patients and 14 deaths. Legionella infects human alveolar macrophages causing potentially fatal pneumonia. The treatment of DL is effective, but failures have been reported due to the appearance of resistance mechanisms. It is therefore important to study the pattern of susceptibility of Legionella to antibiotics and this is the objective of the present work. There were tests for susceptibility to azithromycin, ciprofloxacin and levofloxacin in 42 clinical isolates recovered in Portugal, between 1987 and 2016. The EUCAST 2017 protocol recommends the use of the medium with activated carbon, but as there are discussions about its interference in determining the minimum inhibitory concentration (MIC), we tested two media, BCYE-α (with charcoal) and BYE (without charcoal) using the reference strain Staphylococcus aureus ATCC 29213 for which the MIC values are defined. The tests carried out confirmed the change in the MIC when using charcoal medium, an increase of 4 times for azithromycin and 8 times for ciprofloxacin and levofloxacin versus the values obtained in the standard medium, the Agar Mueller Hinton medium. Reproducing the tests under the same conditions in a charcoal-free medium (BYE), we obtained normal MIC values for ciprofloxacin and levofloxacin, but for azithromycin the MIC value was even higher. With these values we thought about carrying out the susceptibility tests in this medium, but, when testing the growth of L. pneumophila ATCC 33152, there was no growth in the concentration necessary for the MIC technique. For the present study, it was necessary to measure the bacterial concentrations used in the susceptibility tests, but given that the 42 isolates had different morphology, it was necessary to perform CFU / mL counts using the Miles and Misra technique to achieve this standardization. The study used the method recommended by EUCAST 2017 and the results revealed the existence of an isolate with resistance to azithromycin among the 42 tested. It is considered that the performance of similar studies will allow to know the resistance pattern of Legionella in Portugal, contributing to an adequate treatment of LD, avoiding therapeutic failures and costs related to prolonged hospitalizations.