RESUMO: As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) constituem um grupo de doenças hematopoéticas clonais resultantes da transformação de células estaminais hematopoiéticas resultando na anormal amplificação e proliferação de uma ou mais linhagens mielóides. As NMPs são doenças raras, com uma incidência estimada de 6-10/100.000 indivíduos por ano, apresentando maior incidência em indivíduos do sexo masculino, caucasianos e idosos. Neste grupo de neoplasias estão incluídas as NMPs Philadelphia negativas (NMPs-PN), que englobam três entidades principais, a Policitémia Vera (PV), a Trombocitémia Essencial (TE) e a Mielofibrose Primária (MFP). Nestas, as mutações V617F (exão 14) e no exão 12 do gene Janus Kinase 2 (JAK2), alterações nos genes que codificam para o recetor da trombopoitina (MPL) e da calriticulina (CALR) foram identificadas como driver mutations. Este estudo pretende avaliar o nível de expressão de miRNAs numa população de doentes caucasianos com NMPs-PN e determinar a validade de miRNAs específicos como um possível biomarcador minimamente invasivo no seu diagnóstico. Os miRNAsforam selecionados com base em dados publicados e na regulação das vias de expressão relacionada ao gene da caspase 9 (miR-182-5p e miR-301a-3p), via JAK/STAT (miR-125b-5p e miR-375-3p) e resistência terapêutica (miR- 203a-3p e 203b-3p). Um total de 76 amostras de medula óssea fixada em formalina e embebida em parafina (FFEP) de doentes caucasianos portugueses com NMPs-PN e 36 controlos saudáveis foram avaliados por RT-PCR. De acordo com os nossos resultados, a doença predominante foi a Trombocitémia Essencial (TE). No que diz respeito à expressão de miRNAs, não foram identificadas diferenças entre as duas populações: os miR182-5p e miR-301a-3p estão sobreexpressos, o miRNA-375-3p está subexpressos e os miR-125b-5p e miR203a-3p não apresentam tendência. Deste modo, concluímos que não podemos assumir que esses microRNAs são biomarcadores das NMPs-PN, uma vez que existe expressão simultânea em doentes e controlos. No entanto, não podemos excluir essa possibilidade, pois uma caracterização genética mais abrangente poderá contribuir para um melhor entendimento da patogénese da doença.

ABSTRACT: Myeloproliferative neoplasms (MPNs) are a group of clonal hematopoietic diseases resulting from the transformation of hematopoietic stem cells that lead to abnormal amplification and proliferation of one or more myeloid lineages. MPNs are rare diseases, with an estimated incidence of 6-10/100,000 individuals per year, with a higher incidence in males, Caucasians and the elderly. This group of neoplasms includes Philadelphia negative MPNs (PN-MPNs), which encompass three main entities, namely Polycythemia Vera (PV), Essential Thrombocythemia (ET) and Primary Myelofibrosis (PMF). In these, mutations V617F (exon 14) and exon 12 of the Janus Kinase 2 gene (JAK2), Myeloproliferative leukaemia virus oncogene (MPL) and Calreticulin gene (CALR) were identified as driver mutations. The present study aims to evaluate the level of expression of miRNAs in a population of Caucasian patients with PN-MPNs and to determine the validity of specific miRNAs as a possible minimally invasive biomarker in the diagnosis of this group of pathologies. The miRNAs studied were selected and grouped into: relative expression of the caspase 9 gene (miR-182-5p and miR-301a-3p), via JAK/STAT (miR-125b5p and miR-375-3p) and therapeutic resistance (miR-203a-3p and 203b-3p). A total of 76 bone marrow samples fixed in paraffin-embedded formalin (FFPE) from Portuguese Caucasian patients with PN-MPNs and 36 healthy controls were assessed by RT-PCR. According to our results, the predominant disease in the patient population studied was Essential Thrombocythemia (ET). With regard to miRNA expression the miRNAs selected were not differently expressed in both populations: miR-182-5p and miR-301a-3p are overexpressed, miR-375-3p is underexpressed and miR125b-5p and miR-203a-3p do not show any specific tendency. Thus, we conclude that it is not possible to assume that these miRNAs are biomarkers of PNMPNs, since our results indicate that there is simultaneous expression in patients and controls. However, this possibility cannot be excluded, since a more comprehensive genetic characterization may contribute to a better understanding of the pathogenesis of the disease.